引言
CRISPR/Cas9基因编辑系统需高效递送至细胞核，但传统方法难以实时追踪递送过程。FITC-Polylysine通过标记Cas9蛋白或sgRNA，可实现基因编辑工具的动态可视化，为优化递送效率和降低脱靶效应提供数据支持。

载体设计与功能

1. 结构组成：

· FITC-Polylysine：标记载体位置，提供荧光追踪功能。

· Cas9蛋白/sgRNA复合物：通过静电作用与聚赖氨酸结合，形成纳米级递送系统。

· 核定位信号（NLS）：促进载体-基因复合物进入细胞核。

2. 功能优化：

· 细胞穿透肽修饰：增强载体跨膜能力。

· 光控释放系统：通过近红外光触发基因释放，提高时空精准性。

在基因编辑中的应用

1. 递送效率评估：

· 荧光信号显示载体在细胞质和细胞核的分布，指导核定位信号的密度优化。

2. 脱靶效应分析：

· 结合全基因组测序，比较荧光标记组与非标记组的脱靶位点频率，验证载体安全性。

案例研究
在HEK293T细胞中，FITC-Polylysine标记的Cas9/sgRNA复合物在4小时内实现核内富集，基因编辑效率达60%，显著高于未标记组（40%）。该策略为临床前基因治疗研究提供了可视化工具。

技术局限性

· 荧光淬灭：长时间曝光可能导致信号衰减，需采用脉冲式成像或抗淬灭培养基。

· 代谢影响：聚赖氨酸的阳离子特性可能影响细胞代谢，需通过低剂量给药减少干扰。